Использование антиинсулиновой сыворотки для доказательства специфичности АЦ стимулирующего эффекта инсулина
Для доказательства АЦ стимулирующего действие инсулина, а не других пептидных гормонов, не относящихся к гормонам инсулинового суперсемейства, была использована анти-инсулиновая сыворотка (АИС), выработанная в лаборатории на инсулин млекопитающих, которая нейтрализует действие инсулина и, как установлено нами подавляет стимулирующее действие инсулина на АЦ. При добавлении нормальной сыворотки (без инсулина) к фракции скелетных мышц крыс и гладких мышц моллюска, активирующий АЦ эффект инсулина составляет +68% у крыс и +41% у моллюсков. При использовании АИС стимулирующий АЦ эффект инсулина отсутствует у крыс (+7%) и моллюсков (-5%) (Табл. 5).
Полученные данные свидетельствуют о том, что обнаруженное нами активирующее действие инсулина на АЦ в мышечных тканях исследуемых объектов осуществляется именно инсулином и является специфичным при действии этого гормона.
Таблица 5. Нейтрализация АЦ стимулирующего эффекта инсулина в мембранных фракциях скелетных мышц крыс и гладких мышц моллюска в присутствии антиинсулиновой сыворотки
Воздействия |
Активность АЦ (пкмоль цАМФ/мин/мг белка) |
|
Нормальная сыворотка |
Анти-инсулиновая сыворотка |
|
Гладкие мышцы моллюска Anodonta cygnea |
||
Без инсулина |
111.186.13 (100%) |
148.294.31 (100%) |
Инсулин 10-8М |
156.768.54 * (141%) |
158.678.16 (107%) |
Скелетные мышцы крысы |
||
Без инсулина |
97.344.58 (100%) |
115.826.49 (100%) |
Инсулин 10-8М |
163.496.17 * (168%) |
110.037.12 (95%) |
Примечание: приведены данные из трех независимых экспериментов, повторенных три раза. Значения представлены в виде среднего арифметического с учетом ошибки среднего. Различия достоверны (р< 0.05 (*). В скобках - активность АЦ в %. Базальная активность принята за 100%.
Следующая часть работы посвящена расшифровке структурно-функциональной организации механизма АЦ активирующего действия инсулина и ИФР-1.
В этой части работы мы поэтапно исследовали звенья, которые могут быть вовлечены в реализацию действия инсулиноподобных пептидов, начиная от рецептора и заканчивая эффекторными системами, которые являются конечным звеном реализации сигнала.